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脉络学说构建及其指导血管病变防治基础研究
2014-11-19

作为2005年第一批获得立项资助的项目,脉络学说构建及其指导血管病变防治基础研究已经于2009年完成结题验收工作。项目围绕络病学科重要分支——脉络系统开展深入研究,科学诠释经脉与脉络等相关概念的内涵与外延,指出中医学经脉包括脉络与经络,形成经脉系统中相互独立又密切联系的两大网络系统,共同构成了完整的经脉理论,从而形成以脏象为核心,以经脉为枢纽,以气血为基础的中医学术体系;提出脉络学说的核心理论——“营卫承制调平”,系统研究脉络病变发病规律、基本病机、临床证候、辨证治疗,系统构建脉络学说。以“营卫承制调平”为指导开展项目研究,从营气与血管内膜、卫气与血管外膜及全身性NEI网络相关性揭示“脉络-血管系统病”血管内皮功能障碍、动脉粥样硬化、血管痉挛等共性病理环节发展演变及通络干预的效应规律;总结搜剔疏通用药规律,通心络干预以微血管损伤为核心机制的急性心梗无复流、脑梗死及糖尿病微血管并发症显示出显著临床疗效;汇总分析各课题组研究数据,建立对心脑血管病、糖尿病微血管并发症具有普遍指导意义的新理论学说,提出并建立脉络学说完善了中医经脉理论,属中医学重大原始性理论创新,同时提高了血管病变这类重大疾病的防治水平。

       报告全文由如下七个部分构成:一、项目概况;二、项目假说及解决的关键科学问题;三、项目研究目标、研究内容、研究思路及技术路线;四、项目主要成果;五、项目成果的创新点与先进性;六、项目实施效果;七、项目管理经验。本文主要介绍的是报告的第四部分项目主要成果。若想下载报告全文,请注册后下载。

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       (一)首次系统构建中医脉络学说

       1.溯源探流、厘清概念、科学诠释

由于历史的原因造成经脉经络概念混淆,导致脉络学说历史缺位。通过文献整理,溯源探流、厘清概念,科学诠释经脉、络脉、脉络的内涵与外延,指出经脉是人体运行气血的通道,络脉是从经脉分出遍布全身的网络分支。络脉分为经(气)络与(血)脉络,经络运行经气,脉络运行血液,两者形成经脉系统中相互独立又密切联系的两大网络。   

 

《内经》既是经脉系统中运行血液的网络结构,又是心(肺)--脉循环系统的血行通道,同时也是独立的实体脏器——奇恒之腑,其形态学特点中空有腔、与心肺相连、动静脉有别、逐层细分、网状分布;生理学特点藏精气而不泻,保持血液量和质的相对恒定;运动状态为伴随心脏搏动而发生舒缩运动;功能特点为运行血液至全身发挥渗灌气血、濡养代谢、津血互换作用。《伤寒杂病论》首次提出脉络,专篇论述脉络病变,创立通络方药,奠定脉络学说的理论与证治基础。

秦汉时期血脉与经络已成为相对独立并列研究的学术领域,正如《汉书·艺文志》所载:医经者,原人血脉、经落(络),骨髓、阴阳、表里,以起百病之本,死生之分。与现代将经脉混称于经络相比,秦汉时期将气与血、经(气)络与(血)脉络并重研究发病规律显然更具临床应用价值。脉络学说研究脉络病变发病规律、基本病机 、临床证候、辨证治疗,脉络病变常见疾病如胸痹心痛、中风、心悸、心积、心水、支饮、心痹、脱疽等,涵盖了心脑血管病、心律失常、慢性心力衰竭、肺源性心脏病、风湿性心脏病及周围血管病变等严重危害人类健康的重大疾病。提出并建立脉络学说不仅适应心脑血管病这类严重危害人类健康重大疾病防治的社会需求,也完善了中医经脉理论。

2.提出脉络学说的核心理论-营卫承制调平

《易经·系辞》言:形而上者谓之道,形而下者谓之器……”,是古代医家研究脉络病变的思维特点,形而上无形之气为哲学概念并赋予中医学特定内涵——“气主煦之形而下有形血脉为解剖所见发挥重要生理功能——“血主濡之,哲学思想、解剖求证与临床实践三者密切结合形成的气血相关成为脉络学说的理论特色。

元气为生命活动根本动力,宗气贯心脉分为营卫之气,营卫以气血之体作流通之用,营在脉中、卫在脉外(《内经》),营卫不通、血凝不流(《伤寒论》)、血脉相传、壅塞不通(《金匮要略》)、损其心者、调其营卫(《难经》),初具脉络学说的营卫理论之梗概。

基于阴阳五行学说而提出承制调平,是对生命运动自稳态内在调控机制、病理状态下自我代偿性调节、疾病治疗及其效应规律的高度概括。将其与营卫理论相结合构成脉络学说的核心理论——“营卫承制调平:揭示通过”——营卫交会生化的自稳调控机制,或血管病变状态下”——机体代偿性自我调节,”——“络以通为用为总则的通络干预,重新恢复之效应目标,反映了人体作为复杂巨系统、血管病变作为复杂性疾病在生理、病理、治疗、转归不同阶段的内在规律。

 

3.系统阐述脉络病变发病、病机、证候类型与治疗

营卫承制调平指导揭示了脉络血管系统病发病、病机、辨证与治疗规律,指出气候变化异常外感六淫、社会心理应激内伤七情、环境污染影响毒损脉络、生活起居异常劳逸失度、代谢产物蓄积痰浊瘀毒是其主要致病因素,络气郁滞(或虚滞)为始动病机、痰浊瘀毒为代谢产物又可继发致病,形成脉络瘀阻、绌急、瘀塞及络息成积、络虚不荣等基本病机与证候类型。

 

络以通为用治则突出由的中医干预策略——调营卫、气血、阴阳,调五脏之气、气机气化、邪正虚实,减少病理损伤的同时提高机体保护机制,提高机体自适应、自调节、自修复、自稳态,重新达致机体内外环境的和谐平衡状态。

 

4.总结通络干预用药规律,确定实验干预药物并开展质控研究

总结前人经验并结合临床实践将缺血性脉络-血管系统病通络药物概括分为搜剔疏通四类,分别针对脉络病变共性病机与病理环节,通心络正是将四类药物谨严配伍而成,因此选为实验的代表性复方中药。选取四类代表性药物人参、水蛭、蜈蚣、降香,组成降香四味通络方;鉴于降香挥发油成分复杂且易挥发的不足,另外选择了同属流气畅络类药物的薤白作为替代药物,组成薤白四味通络方,从而形成通络复方(通心络为代表)、四味通络小复方、单味药物三个层次的实验药物,同时创新研制了营卫调节方。采用高效液相色谱、气相色谱、高效毛细管电泳等技术,对上述药物及参松养心胶囊、芪苈强心胶囊进行质量控制,保证受试药物稳定可控,便于数据的汇总分析。

 

5.初步揭示通络干预血管病变病证法药关联性的科学内涵

通过对络气郁滞、络气虚滞、脉络瘀阻、脉络绌急动物模型通络药物干预作用强度比较研究显示,针对络气虚滞动物模型益气通络之人参<四味通络方药<通心络;络气郁滞模型疏畅络气之薤白<四味通络方<通心络;脉络瘀阻模型化瘀通络之水蛭<四味通络方<通心络;脉络绌急模型搜风通络之蜈蚣<四味通络方<通心络,显示出通络干预血管病变病证法药关联性的科学内涵。

 

()围绕临床重大疾病,突出临床研究,提高治疗效果

         1.开展3469例血管病变患者临床调查,验证假说,建立脉络病辨证诊断标准,揭示其共性病机及病理环节

         基于中医学为独立的实体脏器,根据以动脉粥样硬化为主要病理机制的缺血性脉络-血管系统病的病变过程,选择从内皮功能障碍到冠心病心绞痛、变异性心绞痛、脑动脉硬化症、短暂脑缺血发作,直至急性心肌梗死、脑梗死、闭塞性动脉硬化症共3469例患者。遵循临床流行病学DME原则,以文献研究和专家咨询获取相关病证四诊信息,制定临床调查表,包括一般情况、中医四诊信息、疾病理化检查及与疾病相关的个体信息。考虑地域差异性,在全国范围内北至哈尔滨南到广州11个城市均衡设定调查点,开展多中心临床调查,研究过程中严格进行质量控制,保证数据真实。

 

采用熵的复杂系统分析方法对原始症状进行无监督分析,避免既往文献研究和专家经验难免主观偏倚的不足,以病理环节为纲,病位、病性、病人、病势为目建立定性与定量、宏观与微观、整体与局部相结合的脉络-血管系统病辨证诊断标准并成为学会标准。

 

依据症状集合而为证候,证候分布揭示病机,通过证候分布规律显示全部调查患者均有络气郁滞或虚滞证候表现(9.48%重叠),痰浊占42.66%、血瘀占58.11%、郁热占24.59%,揭示了脉络-血管系统病共性发病机制及共性病理环节——“络气虚与滞(血管内皮功能障碍、全身性NEI网络失调)为始动病机并贯穿全程,痰、瘀、热(毒)为病理产物又继发致病,缩(脉络绌急与血管痉挛)、窄(脉络瘀阻与动脉粥样硬化)、闭(脉络瘀塞与血管堵塞或闭塞)成为共性病理环节,从临床角度验证了假说。

 

2.“搜剔疏通用药规律对以微血管损伤为核心机制的三大临床难治性疾病显示出明显优势

1)开展通络干预急性心梗PCI术后心肌无复流的临床与基础研究

1)循证医学临床研究证实通心络防治心梗介入后心肌无复流疗效确切

北京阜外医院为组长单位,复旦大学附属中山医院、第二军医大学长征医院、中国医科大学等9家单位参与,采用随机、双盲、安慰剂对照方法,入选219名急性ST段抬高心肌梗死(STEMI)并行急诊介入治疗的患者,随机分为通心络试验组和安慰剂对照组,两组均给予介入和西药常规治疗,疗程6个月,通过心电图、核素扫描、心肌声学造影、超声室壁运动变化评价通心络对心肌无复流的的作用,由卫生部心血管病防治研究中心生物统计部作为第三方设盲与数据分析单位,保证结果客观公正。

结果通心络明显改善PCI术后心电图ST段回落幅度和完全回落率:自术后6h ST段回落幅度通心络组(治疗组)即明显优于安慰剂组(对照组),P0.0524h P0.0124h ST段完全回落率65.74%明显优于对照组45.95%,P0.01,提示心肌无复流明显减少。

核素扫描显示通心络明显增加心肌血流灌注:核素扫描心肌灌注缺损范围指数,通心络组7天、180天优于对照组,P0.05

心肌声学造影显示通心络明显增加心肌微循环血流灌注:声学造影心肌血流灌注值,通心络组7天、180天通心络组优于安慰

剂组,P0.05

超声心动图显示明显改善心脏收缩功能:180天超声心动室壁运动评分指数,通心络组明显优于对照组,P0.01

2)基础研究显示通心络明显保护缺血区微血管完整性,减少心肌无再流,增强eNOS活性是其关键机制

采用冠状动脉结扎建立中华小型猪急性心梗模型,分别采用预给药3天、AMI再灌注前2小时灌胃给药以及AMI再灌注前2小时灌胃给药并维持给药至AMI1周共三套干预方案,建立起围心梗期缺血再灌注动物模型及药物评价体系,结果显示通心络通过保护缺血区微血管完整性减少心肌无复流,增强eNOS活性是其关键机制。

 

2)提出缺血区微血管保护——脑梗死治疗新途径,开辟脑梗死治疗的有效新方法

    基于脉络学说提出缺血区微血管保护——脑梗死治疗新途径,指出通过缺血区微血管保护改善供血,调节微血管内皮细胞分泌功能改善微环境,可以有效减少缺血引起的脑神经损伤。相关研究表明,通心络可通过保护缺血区微血管完整性,促进缺血区侧支循环建立及治疗性血管新生发挥基于微血管保护的脑组织保护作用。

 

同时通络干预影响脑微血管EC分泌功能,既可以调控EC分泌Sema 3ANRP16种活性因子减轻神经元损害,又能抑制小胶质细胞迁移活化及星形胶质细胞过度增生,进而保护血脑屏障及功能,挽救缺血半暗带,缩小脑梗死体积,发挥基于脑微血管EC介导的脑神经保护作用。

 

3)通心络治疗糖尿病微血管并发症取得显著进展

分别建立糖尿病微血管并发症(糖尿病肾病、糖尿病周围神经病变、糖尿病视网膜病变、糖尿病心肌病变)的动物模型,结果显示糖尿病微血管病变的共性病理改变为微循环障碍,表现在微小动脉(包括肾脏、周围神经、视网膜、心肌、大脑海马)硬化、瘀血、闭塞,糖尿病微血管病变共性病理生理学改变为氧化应激水平升高,肾素-血管紧张素(RAS)系统、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)系统的激活,血管内皮生长因子(VEGF)表达增强,C型利尿肽(CNP)表达降低等。通心络可通过调节上述相关因子表达,有效改善糖尿病肾脏、周围神经、视网膜、心肌、大脑海马、胰岛的组织病理学异常变化。

 

 

3.营卫承制调平指导心律失常与慢性心衰研究取得重要进展

               (1提出整合调节-心律失常药物干预新策略,参松养心胶囊循证研究显示快慢兼治特色优势

营卫承制调平拓展用于心律失常研究,提出整合调节——心律失常药物干预新策略,实现由抗律调律的思维转变。经1476例临床循证研究证实:参松养心治疗室早优于美西律(P0.001);治疗阵发性房颤与普罗帕酮相当(P0.05),改善症状优于普罗帕酮(P0.05);同时有效治疗缓慢性心律失常,且无心脏不良反应(西药组为5.1%)。

 

作用机制研究证实该药具有多离子通道阻滞与非离子通道整合调节作用,揭示了临床快慢兼治,且无导致心律失常的心脏电生理基础。

 

                (2)提出气血水同治分消慢性心衰组方原则,芪苈强心胶囊实验研究取得显著效果

提出气血水同治分消慢性心衰组方原则,基础研究证示:芪苈强心改善犬心衰血流动力学与地高辛无差异(P0.05);抑制AngII优于雷米普利(P0.01);增加尿量,减少尿渗量、降低肾脏水通道蛋白2优于速尿(P0.01);降低全心质量指数及脑钠肽水平,抑制心室重构优于美托洛尔(P0.05)。不仅强心、利尿、扩血管,改善血流动力学,还可抑制神经内分泌及交感神经激活,抑制心室重构,改善慢性心衰发生的生物学基础,体现了标本兼治的特色优势。

 

 

() 营卫承制调平指导共性病理环节实验研究

以营卫承制调平为指导,围绕血管病变共性病理环节——血管内皮功能障碍、动脉粥样硬化、血管痉挛,基于营气与血管内皮、卫气与血管外膜、营卫交会与外膜-中膜-内膜相互影响全面揭示血管病变由外到内(“Outsidein”)与由内到外(“Insideout”)的发病机制,初步阐明通络干预血管病变的效应规律。

1.建立络气郁滞/虚滞证候动物模型揭示社会心理因素对血管病变发病影响及通络干预效应

(1)络气郁滞/虚滞证候模型及复合模型的建立及评价

依据脉络血管系统病辨证诊断标准中的证候特征,以慢性束缚建立络气郁滞证候模型,根据中医劳则气耗过逸伤气理论,以疲劳游泳和过度安逸建立络气虚滞证候模型,采用表征观察、影像描述、半定量评分、定量分析等方法进行评价,为深入研究其病理生理学基础和有效干预搭建技术平台,其中过逸伤气证候模型是在脉络学说指导下首次创立的络气虚滞动物模型。

以同型半胱氨酸损伤建立内皮功能障碍病理模型,同型半胱氨酸损伤内皮功能的同时喂以高脂建立大鼠动脉粥样硬化病理模型,以上述证候造模因素与病理损伤因素叠加建立病证复合模型,观察模型血管形态与功能、全身性NEI网络指标变化,并采用模糊聚类及偏最小二乘法等方法对结果进行分析,探讨络气郁滞与络气虚滞证候病理生理学基础,揭示证候因素在血管病变中的作用。

 

(2)络气郁滞/虚滞证候因素(社会心理因素)引起NEI网络紊乱导致血管发生

1)络气郁滞/虚滞证候因素可引起血管内皮结构与功能变化

络气郁滞和络气虚滞证候模型血清NO水平明显下降、血浆ET水平明显升高(与正常组比较P0.050.01),主动脉HE染色结果显示络气郁滞和虚滞证候组内皮细胞轻微肿胀,炎细胞附壁、浸润,平滑肌轻微水肿。透射电镜观察内皮细胞线粒体部分膜融合或消失,粗面内质网扩张,脱颗粒明显。

2)络气郁滞/虚滞证候因素是引起NEI网络紊乱的主要因素

表达相似度分析:络气虚滞型动脉粥样硬化<络气郁滞型动脉粥样硬化<络气虚滞组<络气郁滞组<动脉粥样硬化。表明络气郁滞和络气虚滞状态下全身性NEI网络指标明显紊乱,而单纯病理损伤组变化不明显,复合模型组则显示出两种造模因素的迭加作用。

3)络气郁滞和虚滞证候可通过全身NEI网络紊乱加重血管损伤程度:以偏最小二乘法对络气郁证或虚滞动脉粥样硬化NEI网络因子与内皮功能指标相关性进行分析,NEI网络指标与内皮功能指标存在密切相关,其中AngIICORTTNF-αCRHPRAIL-6NO的影响较为显著,TNF-αIL-6PRACORTTSHET的影响较为显著。内皮功能指标表达相似度比较:络气郁滞型动脉粥样硬化<络气虚滞型动脉粥样硬化<络气郁滞组<动脉粥样硬化<络气虚滞组,复合模型组与正常组相比内皮功能指标相似度显著低于单纯证候和病理模型组。

 

(3)络气郁滞/虚滞证候与高脂饮食+Hcy叠加明显加重动脉粥样硬化(AS

主动脉HE染色、Masson染色和扫描电镜观察显示,络气郁滞/虚滞证候因素与高脂饮食+Hcy叠加可明显加重AS病变,提示社会心理因素在AS进程中发挥重要作用,对中年人过劳死(血管病变)的早期预防具有积极意义

 

(4)建立营卫承制调平数学模型,评价通络干预效应

对络气郁滞(束缚)型血管内皮功能障碍、络气虚滞(过劳)型血管内皮功能障碍、络气虚滞(过逸)型血管内皮功能障碍、络气虚滞(缺氧)型血管内皮功能障碍动物模型的建立及通络干预4批次实验,20个分组,614只动物,18个共性指标,ET/NO上升或下降幅度为转换尺度,建立营卫承制调平数学模型。以此评价不同类别通络药物的干预指数:通心络>薤白>人参>辛伐他汀>贝那普利>降香四味方>薤白四味方。

采用模糊聚类分析方法对通络复方-四味通络方-单味通络药物干预络气郁滞/虚滞型动脉粥样硬化模型血管内皮功能(ETNO)与NEI网络相关因子检测数据分析,证实通络干预在改善血管内皮功能障碍局部病理损伤方面,复方通心络与辛伐他汀相当。

调节整体NEI网络失衡方面,复方通心络明显优于辛伐他汀,显示出复方通络药物不仅修复局部血管病变同时具有调节NEI网络紊乱的优势,同时分析研究证实复方通络药物较四味通络药物及单味通络药物效果显著。

(5)初步阐明络气郁滞/虚滞的代谢物谱特征

采用超高效液相色谱联合离子阱-飞行时间质谱分析对络气郁滞/虚滞证候人群和大鼠进行代谢组学研究,证实络气虚滞/郁滞人群代谢物谱存在差异。基于代谢物变化根据皮尔森相关系数建立了代谢物网络图,络气郁滞证候大鼠色氨酸、精氨酸、胆固醇、烟酸和烟碱代谢异常,络气虚滞证候大鼠能量、磷脂、胆固醇、烟酸和烟碱代谢异常。复方通络药物和单味通络药物可有效改善络气虚滞/郁证证候大鼠代谢状态,促使代谢物谱趋向于正常水平,呈现出营卫承制调平规律。 

2.营卫承制调平指导从外膜-中膜-内膜相互影响研究血管痉挛、动脉粥样硬化发病机制与通络干预

1)营卫承制调平指导从外膜-中膜-内膜相互影响研究血管痉挛发病机制与通络干预

基于营气与内膜、卫气与外膜、营卫交感与外膜-中膜-内膜相互影响,分别以内膜源性收缩因子内皮素-1ET-1)损伤兔血管内皮、白介素-IL-1β)包裹损伤小型猪冠状动脉外膜及硅胶管包裹大鼠颈动脉外膜建立三种血管痉挛动物模型,探讨外膜与内皮损伤导致血管痉挛的机制及通络干预效应。结果显示三种动物模型均可引起血管痉挛。实验兔注射ET-1后体表ECG ⅡT-波升高于5min达最高,注射后6小时模型组心肌损伤标记物肌钙蛋白升高20.03倍;IL包裹小型猪冠状动脉外膜可引起内皮结构功能改变和中膜血管平滑肌收缩性改变,冠脉造影显示模型组5-HT诱发痉挛发生率为91%;硅胶管包裹大鼠颈动脉3天及1周可引起血管呈慢性痉挛的改变,包管侧颈动脉血流量降低,血管对5-HT的收缩反应敏感性增强。通心络干预后可使兔ET1心肌肌钙蛋白水平较模型组下降78.26%,IL包裹小型猪冠状动脉被5-HT再次诱发痉挛发生率下降至17%,有效预防硅胶管包裹外膜损伤所致的血管慢性痉挛及血管对5-HT反应的高敏感,显示出通心络对内外膜损伤所致冠脉痉挛的显著缓解作用。相关机制研究表明外膜损伤所致血管痉挛与AngⅡ及受体、nNOSERK)、Rho-激酶途径、PKC途径有关;内膜损伤所致血管痉挛则与eNOSNO/ET-1PGI2/TXA2分泌失常有关,通心络可通过调节上述因子表达干预内外膜损伤所致血管痉挛。

 

通心络干预ET-1所致兔冠脉痉挛模型升高NOPGI2和内皮源性一氧化氮合酶(eNOS),降低TXA2及内源性BIGET-1,抑制氧化应激均明显优于西药钙离子拮抗剂硫氮唑酮和Rho-激酶阻断剂法舒地尔。通心络剂量依赖性抑制PKCRho-激酶表达与活性,硫氮唑酮无此作用,法舒地尔可抑制PKCRho-激酶活性,但对其表达无影响,显示出通心络缓解血管痉挛与上述两种西药作用途径不同。研究还显示硅胶管包裹所致颈动脉痉挛模型血管内皮组织中eNOS表达呈逐渐减少趋势,血管外膜nNOS表达呈逐渐增加趋势,表明外膜源性nNOS和内膜源性eNOS有相互代偿作用,通心络不仅使eNOSNO水平升高,也通过激活ERK分子信号通路增加nNOS表达,使NO水平上升。

 

2营卫承制调平指导从外膜-中膜-内膜相互影响研究动脉粥样硬化发病机制与通络干预

采用酶消化法成功建立了内、外膜损伤致AS形成的动物模型,并初步揭示了外膜-中膜-内膜间的相互作及机制。通过胶原酶消化+机械分离的方法,损伤新西兰兔左侧颈动脉外膜后,再分别给予普通饮食和高脂饮食喂养8, 结果发现普食条件下,与对侧正常颈动脉相比,外膜损伤侧血管有明显的内膜增生性病变形成,内膜面积/中膜面积 (IMR)明显增加。高脂饮食组则在外膜损伤侧形成典型的AS斑块。在同一个体双侧颈动脉分别建立了内膜损伤和外膜损伤致AS模型,用I型胶原酶消化法分别损伤内膜和外膜,损伤后给予高脂喂养8周,结果发现内膜损伤和外膜损伤均可诱发AS形成,1周时外膜损伤较内膜损伤程度重,8周时外膜损伤形成的斑块负荷较内膜损伤轻。

 

相关机制研究发现内外膜损伤对血管中膜影响与氧化应激、炎症免疫、神经内分泌激活有关,MAPK-NF-κB是内外膜损伤引起AS病变的共同通路。通络方药(通心络和营卫调节方)干预可减少内、外膜损伤所诱导的AS斑块负荷面积,还可改变斑块内的成分构成。同时可抑制血管外膜损伤后NADPH氧化酶亚单位p22phox mRNA的表达,抑制外周血及血管局部组织炎症因子水平及CD40-CD40L轴病理性表达升高,还可抑制血管局部去甲肾上腺素释放,上调乙酰胆碱释放幅度;抑制甲状腺激素相关蛋白表达;调节内源性大麻素系统表达,纠正血管外膜损伤导致的神经内分泌功能紊乱,明显抑制MAPK-NF-κB通路因子的活化发挥抗AS作用。

 

3)通心络稳定易损斑块研究取得重要进展

采用腹主动脉球囊损伤、高脂饲料喂养、斑块内注射携带人野生型p53基因建立兔易损斑块模型,筛选出预测斑块易损的新指标。通心络可呈剂量依赖性降低易损斑块破裂率,与辛伐他汀相当(7.7 vs 7.0%P0.05)。其作用机制与其调脂、抗凝、调节炎症胶原代谢网络平衡、抗氧化作用有关。体外实验表明通心络通过抑制EC TLR4-P38 MAPK通路,发挥抗炎、抗凋亡效应;薤白可抑制内皮细胞LOX-1TF蛋白表达,发挥抗凝作用。

 

3.从细胞模型上揭示营卫承制调平的效应规律

1)营卫交会代偿调节在血管外膜-EC”共孵育模型中的体现

基于营气与内膜,卫气外膜相关性建立外膜-内皮细胞共孵育模型,探讨营卫交会代偿调节,结果发现以AngⅡ单独孵育内皮细胞可引起内皮细胞损伤,加入血管外膜后AngⅡ诱导外膜组织分泌的NO水平代偿性增加,抑制AngⅡ诱导的血管内皮细胞凋亡,其作用为AngⅡ激活外膜NOS/NO途径介导,通心络和营卫调节方均通过调节该途径提高AngⅡ作用下外膜NO水平,保护血管内皮。

 

2)营卫承制调平在细胞模型中的体现

               1)从炎症与免疫角度阐释通心络对氧化低密度脂蛋白诱导的人单核细胞来源树突状细胞(DCs)的免疫成熟的抑制作用

通过检测树突状细胞(DCs)表面标志表达、细胞因子分泌、吞噬作用改变,并应用RNA干扰技术抑制PPARγDCs中的表达,观察通心络(TXL)对OX-LDL诱导的DCs分化和成熟程度的影响,结果显示,TXL能够有效抑制OX-LDL诱导的DCs表面共刺激分子CD86CD40CD1aHLA-DR的表达,增加DCs的吞噬功能,减少细胞因子IL-12TNF-α的分泌。应用RNA干扰技术降低PPARγDCs中的表达后,TXLDCs免疫成熟的抑制作用显著减弱。

2)通络干预减少软脂酸引起的内皮细胞(EC)凋亡

软脂酸(PA)处理导致70% EC凋亡,通心络通过激活AMPK通路启动保护机制,增强硫氧还蛋白抗氧化系统,降低硫氧还原交互作用蛋白表达,同时抑制MAPK通路减少损伤因素,降低活性氧表达,使EC凋亡率降至7%P0.05)。对PA诱导EC损伤的蛋白芯片研究显示经通心络干预后90余个蛋白表达下调,100余个蛋白表达上调。

3)通络干预提高EC耐缺氧HIF表达增强自适应存活能力

缺氧条件下人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中HIF表达被激活,其转录活性呈现一定程度升高,通心络提高HUVEC在缺氧条件下存活率的作用明显依赖HIF的表达水平。通心络上调HIFeNOS的作用对PI-3K/Akt通路具有明显依赖性,并可显著上调抗凋亡因子Bcl-2Mcl表达,抑制促凋亡因子Bax表达,降低细胞凋亡百分率(P0.05)。

4)首次建立络气虚滞证候血清EC损伤模型,通心络激活JNK/c-Jun/HO-1通路改善EC损伤

首次建立络气虚滞(过劳)血管内皮功能障碍模型血清孵育致EC损伤模型,通心络可通过激活ECJNK/c-Jun/HO-1信号通路,使LDH漏出率由65%降低至35%P0.01)。

5)通心络通过MAPK通路抑制糖基化终末产物(AGEs)引起的内皮祖细胞凋亡,促进增殖、黏附和迁移

在体外分离培养人外周血内皮祖细胞(EPC),通心络除可明显促进EPCs的增殖、迁移和黏附功能外,还能上调eNOS mRNA和蛋白表达,AGEs-RAGE-MAPK通路是AGEs促进EPCs凋亡、抑制增殖的重要途径之一,通心络可通过这一信号途径调节EPCs的功能,发挥促进EPCs增殖、黏附和迁移,以及抗凋亡的保护作用。

6)通络方药通过RAGE-MAPK-NF-κB通路改善AGEsADSCs的损伤作用

采用ROS氧化荧光探针技术和oxyblot方法分析不同浓度晚期糖基化人血清白蛋白(AGE-HAS)对人脂肪来源干细胞(ADSCs)氧化应激水平的作用,发现AGE-HSA可上调细胞内氧化应激水平;对相关信号通路的进一步深入研究发现:AGEs可通过晚期糖基化终产物受体(RAGE-MAPK-NF-κB通路上调细胞内氧化应激水平,抑制ADSCs,使用MAPK通路相应的抑制剂以及通络药物可通过阻断上述信号通路促进细胞的迁移。

细胞模型研究揭示了通络干预由的科学内涵

血管病变始终存在着损伤与修复的矛盾,干预治疗不仅要抗凝、降脂、抗炎以祛除病理损伤因素,更要重视人体自我修复能力的调动。营卫承制调平的治疗观区别于还原论以直接对抗致病因子为目标的治疗思想,而是在整体系统论指导下通过调动人体抗病自愈修复的自组织调节能力,逐渐改变邪正进退最终达至阴阳自和的自稳平衡状态。开展的软脂酸、缺氧、树突状细胞、氧化低密度脂蛋白、糖基化终末产物(AGEs)对内皮的损伤机制及通络药物的保护作用,显示通心络不仅有效干预上述病理产物所致内皮损伤,同时还可激发人体的内源性保护机制,显示出对血管病变的独特干预价值。

 

4.研究结果显示复方通络药物治疗血管病变由“调”致“平”的系统效应

复方通络药物不仅可以降脂抗凝,还可通过抑制氧化应激、炎症免疫损伤,调动机体内在保护机制及干预全身性神经内分泌免疫稳定失衡发挥保护血管内皮、抑制稳定易损斑块及解除血管痉挛作用,从而发挥基于血液保护和血管保护的心脑组织及肾脏保护作用,显示出复方通络药物治疗血管病变由“调”致“平”的系统效应——提高自适应、自调节、自修复,恢复机体自稳态。

 

5.数据分析,系统整合,支持脉络学说核心理论-营卫承制调平

汇总各课题组基础与临床研究数据,采用基于熵的复杂系统分划方法、Meta分析、聚类分析、贝叶斯网络分析、TOPSIS(综合评价)、对应分析、析因试验设计、主成分分析法、典则相关分析、灰色系统模型(线性与非线性)等对研究数据进行数据处理,为脉络学说核心理论——营卫承制调平提供数据支持。